摘要:
以褐籃子魚為原料,使用Biochrom30+全自動氨基酸自動分析儀對其肌肉的氨基酸組成進行分析。結果表明褐籃子魚肌肉中氨基酸總量的質量百分比為17770.7mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的39.37%,鮮味氨基酸占氨基酸總量的39.27%。
一、樣品前處理
1、所用試劑
1.1 濃鹽酸,濃度≥36%,優級純
1.2 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。
1.3 水:去離子水
1.4 苯酚:須重蒸
1.5 17種氨基酸標準品
2、前處理設備
1) 析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。
2) 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL
3) 勻漿機。
4) 無油真空泵
5) 干浴水解濃縮儀
6) 移液管
7) 0.22um濾膜
3、樣品制備(參考國標GB 5009.124-2016)
原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內臟,采肉后清洗、瀝干,在勻漿機中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷凍保存,分析時取出解凍后使用。
4、試樣水解
稱取含蛋白7.5-25mg的試樣,加入水解管中,加入15mL 6mol/L鹽酸,繼續向水解管內加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮氣,重復抽真空-充入氮氣3次后,在充氮氣狀態下擰緊螺蓋。將水解管放入干浴水解濃縮儀中,110°C水解22-24h,冷卻、混勻、開管、轉移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取適量樣液,在干浴水解濃縮儀中50°C吹干,必要時加入少許水,重復吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀釋上機用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉移至儀器進樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析儀分析方法參數:
1) 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6x20cm
2) 分離程序:
3) 運行時間:經分析時間+再生時間 57min
4) 反應單元溫度:135°C。
5) 檢測波長:570nm、440nm同時檢測。
三、樣品中氨基酸含量的計算
樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計算:
ci = cs /As ×Ai ……………………(2)式中:
ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;
As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;
cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。
試樣中各氨基酸的含量按式(3)計算:
Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 …………(3)式中:
Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);
ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
F ———稀釋倍數;
V ———試樣水解液轉移定容的體積,單位為毫升(mL);
M ———氨基酸i的摩爾質量,單位為克每摩爾(g/mol);
m ———稱樣量,單位為克(g);
109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數;
100 ———換算系數。
附、褐籃子魚分析圖譜及做樣結果
全自動氨基酸分析儀
由具有50年專業氨基酸分析制造經驗的Biochrom公司生產。能夠出具無爭議的國際和國家標準的檢測報告,為您帶來準確的分析結果以及和歐美接軌的技術服務的儀器。
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